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如何溶解多肽?

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如何溶解多肽?

发布日期:2019-09-25 作者: 点击:

我们建议在溶解之前用蒸馏水或无菌水进行小试,对于较短的寡肽(小于5aa)常常能够直接溶解。对于其他的多肽,大多需要根据多肽的序列优化溶解条件,并测试几种不同的溶剂,直至找到最优方法(超声处理有助于打碎颗粒,增加溶解度)。

多肽的极性对溶解度有很大的影响:酸性的蛋白易溶解于碱性溶液,而酸性溶液则适合碱性蛋白。

可以用下表氨基酸的酸碱度值的加和来计算多肽的酸碱度:


氨基酸名称 酸碱度赋值

氨基酸名称

酸碱度赋值

D, E, C-terminus

-1

K, R, H, N-terminus

+1

F, I, L, M, V, W, Y, G, A, S, T, C, N, Q, P, 乙酰基,酰胺基

0

按上述原则,得分大于0为碱性多肽,得分小于0的为酸性多肽,得分为0为中性多肽。


举例说明:


RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 认为是碱性多肽

EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 认为是酸性多肽

AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 认为是中性多肽


1. 对于碱性多肽,如果纯水无法溶解,请尝试10% - 30%的醋酸;如果多肽还是不溶,测试纯醋酸和三氟乙酸TFA(<50 μl)来溶解,然后将多肽溶液稀释到需要的浓度。

2。 对于酸性多肽,如果纯水无法溶解,请尝试13% 氨水(v/v)来溶解,并稀释至所需浓度。如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys(C),不能用氨水溶解,需使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多肽,则选择6M的胍盐酸(guanidine?HCl)或8M的尿素(Urea)来溶解,然后稀释到需要的浓度。

3. 中性多肽应选用机溶剂来溶解。首先,尝试使用乙腈 (acetonitrile) ,或甲醇 (methanol) 或异丙醇 (isopropanol)进行溶解;对于疏水性非常强的多肽,先用少量的二甲基亚砜(DMSO)溶解,并用水稀释到需要的浓度。同理,如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys(C),需使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多肽,则选择6M的胍盐酸(guanidine?HCl)或8M的尿素(Urea)来溶解,然后稀释到需要的浓度。


问: 如何保存多肽?

答: 1。 为了方便储存及后续使用,建议将多肽溶解至浓度为1-2 mg/ml左右。

2。 为了防止或尽量减少多肽降解,请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C,-80°C更佳。如果需要保存溶液肽,最好分成小样存放,以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完,应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦,所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

3。 多肽序列中含有甲硫氨酸Met(M),半胱氨酸Cys(C)或酪氨酸Tyr(Y),建议保存于无氧环境防止氧化。


问: 如何选择适合自己研究的多肽纯度?

答: 粗品肽不推荐用于生物实验。粗肽可能含有大量的非肽类杂质,如残留的有机溶剂、清除剂、TFA和其他不完整肽。TFA不能被完全消除,通常交付的肽以TFA盐的形式存在。如果残留的TFA影响您的实验,我们推荐其他盐形式,如醋酸盐和盐酸盐等。这些盐通常比常规TFA盐贵20-30%以上。这是由于在转化过程中出现更多的肽损失和需要更多的原材料。


NovoPro建议对各种项目采用以下级别的肽纯度:


多肽纯度

适用项目

>70% 肽纯度

肽微阵列
层析法
酶联免疫吸附试验检测抗血清滴度

>80% 肽纯度

免疫印迹法(非定量)
酶底物肽(非定量)
多克隆抗体制备
亲和纯化

>90% 肽纯度

NMR研究
质谱分析
单克隆抗体制备
磷酸化检测

>95% 肽纯度

ELISA试验和RIA(定量)
受体配体相互作用(定量)
体内、体外 生物活动测定
酶的研究和阻断实验(定量

>98% 肽纯度

NMR研究
药物活性成分
X-ray晶体研究
其他敏感的生物检测



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